SILVER CHINS

Примечание: компоненты выражены в процентах по весу.

Промытый остаток был помещен в 0,5 мл гидроксида гиамина (New England Nuclear) при 60°с на 1 час и добавлен к 10 мл сцинтилляционной жидкости (5,0 г 2,5-дифенилоксазола (PPO), 0,3 г п-бис-(2-(5-фенилоксазол)) - бензол (POPOP) в 1 литре толуола) в ампулу для подсчета радиоактивности. После охлаждения и тщательного встряхивания образцы считывали в течении 10 минут с помощью жидкого сцинтиллятора (Isocap 300, Nuclear Chicago). Результаты были скорректированы по эффективности и скорости остановки реакции, и записаны как распад в минуту на 106 клеток. Эти скорректированные значения были логарифмически преобразованы и выражены напрямую как грубая стимуляция либо как чистая стимуляция после вычитания количества контрольных культур.

Результаты и обсуждение.

Диеты и продуктивность животных.

Предлагаемые диеты влияли на продуктивность животных, которая измерялась как прирост массы тела и отложение азота (Таблица 2). Тем не менее, эти показатели продуктивности животных сильно различались, так как некоторые животные адаптировались к низкокачественным рационам, компенсируя их повышенным потреблением корма. Поскольку эта изменчивость имела тенденцию маскировать эффекты от питания, для последующих анализов параметры иммунологической функции были регрессированы против показателей продуктивности животных (массы тела и отложения азота).

Реакция выращенных клеток в пробирках на фитомитогены.

Клетки костного мозга и селезенки шиншиллы реагировали как на конканавалин А, так и на фитогемагглютинин. Хотя периферические лимфоциты (кровь, селезенка и лимфатические узлы) большинства видов реагируют на эти митогены в культуре, способность к реагированию лимфоцитов костного мозга варьируется (Moorhead и Claman 1972; Byrdetal. 1973). Конканавалин А и фитогемагглютинин специфичны для тимусных клеток, которые могут находиться в центральной или периферической лимфоидной ткани (Janossy и Greaves 1971).

Таблица 2: Изменения массы тела и отложение азота ушиншилл, отнятых от матерей, при питании с различным содержанием сырого белка.

Примечание: Средний общий прирост и среднее общее отложение азота выражены как измеренное значение +- стандартное отклонение.

Стимулирующее соотношение PHA/Con A у шиншиллы составляло 0,94-0,98 для селезенки и 1,00-1,05 для костного мозга. У "CBA/J" мышей это соотношение достигает 0,72 в селезенке и 0,39 в костном мозге (Stobo и Paul 1973). У мышей подмножества с высоким соотношением находятся преимущественно в селезенке, тогда как у шиншиллы они, по-видимому, равномерно распределены между селезенкой и костным мозгом.

Питание и отзывчивость InVitro

В целом, реакция клеток костного мозга была обратно пропорциональна показателям продуктивности животных, при этом стимуляция скудно питающихся животных превышала таковую у хорошо питающихся в 3-5 раз (таблица 3, таблица 4). Чувствительность к Con A, выраженная как грубая или чистая стимуляция, отрицательно коррелировала и с массой тела и с максимальной ретенцией азота. Валовая, но не чистая стимуляция PHA отрицательно коррелировала с отложением азота.

Таблица 3: Коэффициенты регрессии, описывающие значимые (Р<0.5) взаимосвязи между валовой стимуляцией и измерениями пищевого статуса.

Примечание:  Незначительно, н.з.  В круглых скобках обозначены коэффициенты регрессии, приближающиеся к значимым.

Таблица 4: Коэффициенты регрессии, описывающие значимые (Р<0.5) взаимосвязи между чистой стимуляцией и измерениями пищевого статуса.

Заметка:  Не значительно, н.з.  Круглые скобки обозначают коэффициенты регрессии, приближающиеся к значимости.

С другой стороны, стимуляция клеток селезенки оказалась напрямую связана с производительностью. Валовая стимуляция PHA напрямую связана с массой тела. Чистая стимуляция PHA значительно коррелировала как с массой тела, так и с максимальным отложением азота. Реакция на Con A не была статистически значимой, но также имела тенденцию демонстрировать прямую связь с продуктивностью животных.

Buckleyandco-workers (1973) подчеркнули различие этих двух методов выражения чувствительности лимфоцитов (чистая и грубая стимуляция). Способность клеток к трансформации может быть ухудшена из-за нарушения способности синтезировать нуклеиновые кислоты или из-за того, что клетки спонтанно подвергаются трансформации со скоростью, при которой стимуляция неэффективна. В этом исследовании наблюдалась та же качественная картина, независимо от того, валовые или чистые измерения симуляции были использованы. Однако, хотя эта картина не была замаскирована, фоновая стимуляция (включение тимидина в контрольную культуру) была связана с пищевым статусом (таблица 3). Спонтанная трансформация в культурах селезенки и костного мозга отрицательно коррелировала с отложением азота. В культурах костного мозга фоновые показатели коррелировали как с максимальным отложением азота, так и с массой тела. Основа такой реакции непонятна. Однако это может быть связано с более молодым физиологическим возрастом, широко наблюдаемым у животных на ограниченном рационе. Stitesetal. (1972) сообщили о снижении спонтанной трансформации лимфоцитов по достижении зрелости.

Необычная обратная связь между чувствительностью селезенки и костного мозга к растительным митогенам была несколько неожиданной. Ответ лимфоцитов из периферического отсека (селезенка) согласуется с более ранними исследованиями. Smythe et al. (1971) обнаружили сниженную чувствительность лимфоцитов к фитогемагглютинину при недоедании. Hudson (1973) обнаружил сходную реакцию лимфоцитов периферической крови у снежных баранов, подвергшихся стрессу. Если этот ответ характерен для всех типов стресса, его можно интерпретировать с точки зрения действия глюкокортикоидов, которые вызывают тимолимфатическую инволюцию посредством действия цитолитов на лимфоциты. Тем не менее, исследования показали, что лечение кортизоном в физиологических пределах может, на самом деле, быть выбрано для популяции митоген-чувствительных клеток таким образом, что стимуляция на базис клетки может быть увеличена (Levine и Claman 1970). Это обогащение чувствительных клеток является одним из возможных объяснений усиленного ответа костного мозга, но недавняя работа Moorhead и Claman (1972) выдвинула другую гипотезу. В их исследовании было обнаружено, что введение гидрокортизона вызывает перераспределение устойчивых к кортизону, PHA-чувствительных клеток из селезенки в костный мозг. Аналогичные наблюдения были сделаны Коэном (1972). Это, по-видимому, является правдоподобным объяснением быстрого лимфосепениса и ингибирования рециркуляции клеток после стресса или лечения кортизоном (Spry 1972).

Мало что известно о механизме этой видимой секвестрации. Гормональные изменения могут менять поверхностные составляющие клеток, которые необходимы для нормальной рециркуляции, либо могут влиять на эластичность стенок сосудистой сети костного мозга, делая ее менее проницаемой для выхода клеток.

Отношения стимуляторов PHA к Con A при пищевом стрессе значительно не менялись. Тем не менее, соотношение стимуляторов костного мозга, как правило, было ниже (P = .20), тогда как соотношение для селезенки, как правило, было выше (P = .08) у животных с улучшенным питанием. Поскольку высокие стимуляционные соотношения характерны для быстро рециркулирующего подмножества T-клеток (Stobo и Paul 1973), это может указывать на то, что перераспределение клеток из периферических лимфоидных тканей в костный мозг может быть предпочтительным. Тем не менее, существует ряд альтернативных объяснений, и необходимы дальнейшие исследования, чтобы поддержать это утверждение.

В данном исследовании было показано, что белковое питание вызывает изменения чувствительности митоген-чувствительных клеток селезенки и костного мозга. Хотя это является косвенным доказательством, обратная связь, существующая между лимфоцитами в этих двух органах, позволяет предположить, что перераспределение Т-клеток из селезенки или, возможно, других периферических лимфоидных органов в костный мозг может происходить подобно тому, которое наблюдается после экспериментальной инъекции кортизона. Это явление может способствовать нарушению клеточного иммунитета, связанного с ограничением питания.